### 293T细胞培养指南

293T细胞，最初被称为293tsA1609neo，是一种高转导衍生细胞株，源自293（HEK-293）细胞，经过SV40T抗原的温度敏感基因插入而形成。

#### 细胞基本信息

• 细胞名称：人胚肾细胞
• 细胞别名：Hek293T; HEK-293T; HEK293T; HEK-293-T; 293-T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo
• 种属来源：人
• 组织来源：肾
• 细胞形态：上皮细胞样
• 生长特性：贴壁生长
• 培养体系：MEM+10% FBS+1% P/S
• 传代比例：1:2~1:4，每2-3天换液一次
• 培养条件：气相：95%空气 + 5%二氧化碳，温度：37℃
• 冻存条件：冻存液：60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO；存储条件：液氮
• 安全性：建议在二级生物安全台内操作，并做好个人防护。

#### 复苏及传代方法

1. **细胞株的复苏（冻存管）**

• 将冻存管在37℃水浴锅中迅速完全融化，并轻轻摇晃促进融化。快速融化能提高细胞复苏效果。
• 在打开冻存管前，用75%酒精擦拭其外壁。
• 将完全融化的细胞离心或转移至无菌离心管中（15ml或其它合适无菌管），以400g离心5分钟，吸去上清，注意不要吸走细胞沉淀，随后用新鲜培养液重悬并转移至培养器皿，混匀，置于CO2培养箱37℃培养。
• 次日根据贴壁或生长状态更换培养液。如果冻存管暂时无法复苏，请将其置于-80℃或液氮中保存，并尽快复苏培养。

2. **细胞株的复苏（T25瓶）**

• 去除T25瓶包装后，用75%酒精擦拭瓶外壁。
• 在倒置显微镜下观察细胞状态。如无异常，移去多余培养液，放置于CO2培养箱37℃培养过夜。
• 次日根据贴壁或生长状态换液或传代，建议传代比例为1:2~1:4。

#### 注意事项

• 每支冻存管约含1×10⁶个细胞，体积为1ml，预期存活率为60-90%。建议复苏至1个T25瓶或1个6cm培养皿中。若存活率较低，可消化后转移至35cm培养皿或T125瓶中以提升细胞生长。
• 若产品为常温运输且培养瓶内充满培养液的贴壁细胞，收到后应及时拍照记录是否有漏液或瓶身破损。用75%酒精擦拭培养瓶表面，观察细胞状态。切勿立即打开瓶盖，应将细胞置于培养箱静置2~4小时稳定细胞状态，之后进行镜检和拍照记录。
• 若细胞密度超过85%，应尽快进行传代；如果有悬浮细胞过多，可将培养瓶静置于培养箱中过夜以促使其粘附。收到的常温运输的离心管内悬浮细胞可直接转移至培养皿或培养瓶中培养。若培养液颜色正常，可保留原培养液继续培养，在首次换液时保留一半原液，加入一半新鲜培养液，以避免因培养液或血清差异导致的细胞适应问题，确保良好的生长状态。
• 细胞培养操作应在生物安全柜内进行，并严格遵循无菌操作规范。