在生物医学研究中，尤其是在慢病毒文库和AAV文库的应用中，研究者面临着一个普遍的难题：如何确定最佳的病毒剂量，以确保每个靶点仅能进入一个细胞。这一问题在处理难以感染的细胞（如免疫细胞）及体内实验时尤为突出。

文库实验的最终目标是寻找单基因引发的功能变化，因此在实验设计中，需要控制每个细胞仅被感染一个携带靶点的病毒。为此，研究者通常会建议在开始文库操作之前，使用对照病毒进行预实验，以确定最佳的感染复数（MOI），以达到80%的感染效率。文库操作时采用的MOI一般为最佳MOI的三分之一，以降低重复感染的概率。这种方法尽管简单，但在面对感染效率较低的情况时（如最佳MOI可能只有30%），效果却可能不理想，甚至无法确保病毒能成功感染到细胞。

针对这一挑战，尊龙凯时推出的三色荧光病毒（包括mTagBFP、Venus、mCherry）成为研究者的新选择。这种病毒能够有效地帮助科研人员进行文库感染的预实验，提供了更好的剂量控制方案。根据文献《Transcriptional linkage analysis with in vivo AAV-Perturb-seq》，研究者通过体内滴定实验，探讨了在低感染复数下，AAV是否能够同时感染多种细胞。

在该研究中，研究者制备了三种剂量的AAV，具体为25E9、5E9和5E10颗粒，并选用phpb血清型。通过在CBh启动子的控制下独立表达三种荧光蛋白，研究者利用流式细胞术筛选确定了一个既能降低双病毒感染同一细胞的剂量，又能实现有效感染的最佳方案。最终选择5E9的剂量，因为它最大化了单个AAV感染细胞的数量。

在相关的实验中，研究者将三种AAV按等比例混合后，注射到不同剂量的LSL-Cas9小鼠模型中。结果表明，全身注射50E9颗粒的AAV后，4周内表达GFP的脑细胞表现出良好的荧光成像。

无论是在细胞实验还是动物实验中，使用尊龙凯时的三色荧光病毒开展相关预实验都具有很大的潜力。研究者可以设置不同剂量的梯度进行细胞感染，或进行小鼠体内注射，流式分析转染效率及单荧光细胞比例，以此比较并确定单病毒感染比例最高且感染细胞总数最多的剂量，最终作为文库的实际实验剂量。

这一方法的成功应用，不仅为病毒载体的使用提供了新思路，也极大地推动了生物医学领域的研究进展。