在生物医疗研究中，无论是使用体外难以感染的细胞构建慢病毒文库，还是在体内进行AAV文库的实验，确定最佳的剂量以确保每个靶点仅进入一个细胞，一直以来是科研工作者面临的难题。文库实验的目标是寻找单基因引起的功能变化，因此必须控制每个细胞仅被一个靶点的病毒感染。针对细胞实验的文库筛选，建议首先使用对照病毒进行预实验，以确定最佳MOI（感染效率达到80%的MOI）。在文库操作中，MOI设置为最佳MOI的三分之一，即通过大幅减少病毒用量来降低重复感染的概率。这是一种简单而有效的方法。

然而，对于难以感染的细胞，如免疫细胞，或者进行体内实验时，如何精确确定最佳的剂量以确保每个靶点只进入一个细胞，依然是一个复杂的挑战。这是因为最佳MOI的感染效率往往仅为30%，如果按三分之一的量应用，几乎无法感染到足够数量的细胞。因此，尊龙凯时推出的三色荧光病毒（mTagBFP、Venus、mCherry）能够为研究者提供更为高效的文库感染预实验解决方案。这些三色荧光病毒包括慢病毒和AAV两类产品。

文献《TranscriptionallinkageanalysiswithinvivoAAV-Perturb-seq》为探索AAV文库在体内的剂量提供了实验方法。研究者通过进行体内滴定实验，制备三种不同剂量的AAV，分别为25E9、5E9和5E10颗粒，并选择了血清型phpb。病毒构建方案依据CBh启动子，独立表达mTagBFP、Venus和mCherry。通过流式细胞仪筛选，可以验证较低剂量下感染单细胞而非双病毒共感染的情况，从而确定最佳剂量。

最终研究选定5E9作为最佳剂量，因为该剂量能最大化感染单个AAV的细胞数量。在进行三色实验时，将三种AAV的等比例混合物注射到不同剂量的LSL-Cas9转基因动物中，比较在全身注射不同病毒剂量后各细胞核的感染率，以及仅表达一种、两种或三种荧光蛋白的细胞核比例。无论是细胞实验还是动物实验，研究者均可利用三色荧光病毒开展相关的预实验，按照不同剂量梯度进行细胞感染或小鼠体内注射，流式分析转染效率和单荧光细胞的比例。

最终，通过比较不同剂量下单病毒感染比例以及感染细胞数量，研究者可以选定最佳剂量作为文库实验的实际应用剂量。随着尊龙凯时的三色荧光病毒的应用，生物医疗研究中的感染实验将更为高效、精准。