一、概念

1. 细胞系（Cell Line）

细胞系是指从原代培养物成功传代后所形成的细胞群体，其构成由原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）所组成。

2. 细胞株（Cell Strain）

细胞株是通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特定特性或标志物的细胞。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养过程中始终存在。细胞株可分为有限细胞株（finite cell strain）和连续细胞株（continuous cell strain），具体取决于是否可以持续传代。对于人类肿瘤细胞，若在体外培养超过六个月并且生长稳定，便可称为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

细胞的鉴定和认可标准并无统一规定，视具体情况而定。对于原代培养的细胞，需确保供体均一，对取材部位及组织种类等条件的稳定性有一定要求。特别是长期培养或反复传代的细胞，通常需要提供以下信息：

1. 组织来源

提供细胞供体的物种信息，包括是否来自人体或动物、个体性别、年龄以及取材的器官或组织。如果源自肿瘤组织，还需说明临床和病理诊断信息及病历号。

2. 细胞生物学检测

了解细胞的一般和特殊生物学特性，例如细胞形态、特异结构、细胞生长曲线、分裂指数、倍增时间及接种率。对于肿瘤细胞，需要进行更为细致的实验，例如软琼脂培养、异体接种致瘤及对正常组织侵润力的检测，确保其源于原肿瘤组织并保持恶性。

3. 培养条件和方法

应详细说明细胞系（或株）适应的培养环境，包括所用培养基、血清种类、用量以及适宜的pH值。

三、细胞建株的要点及基本过程

(一) 肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：最佳材料来源于外科手术或活检的肿瘤组织，应避免使用坏死组织，尽量选择活力良好的瘤细胞部位，如淋巴结或胸腹水。取材后应迅速培养，若不能立即进行可进行冻存，相关培养及冻存方法参考正常组织。

2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织中常存在成纤维细胞，这些细胞可与肿瘤细胞共同生长并抑制癌细胞的生长。因此，需要采取措施仔细排除成纤维细胞，常用方法包括机械刮除、反复贴壁法等。

3. 提高肿瘤细胞存活率和生长率：肿瘤细胞在体外培养较为困难，建立可传代的细胞系更为具有挑战性。应考虑采用适宜的底物（如鼠尾胶原）和细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松等）以提高细胞生长的适应性。

(二) 人类淋巴母细胞建株方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，再加入2ml RPMI 1640培养基，并充分混匀。
2. 沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上，静置30分钟。
3. 以1500 rpm离心15分钟，吸取白细胞层置于另一离心管中。
4. 用5ml RPMI 1640洗涤白细胞两次。
5. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl EB病毒液，混匀后在37℃恒温水浴摇床中培养3小时。
6. 离心1500 rpm 15分钟后，将细胞接种至含有1ml培养基（含1mM/ml谷氨酰胺）的管中，再加入10μl环胞霉素，轻轻混匀并在37℃培养。
7. 观察细胞转化和生长情况，决定是否进行半量换液，通常每1—2次半量换液需维持环胞霉素浓度。
8. 当转化细胞数量显著增加，并出现细胞团块后，可转入25ml细胞培养瓶中，添加1—2ml培养基，在37℃培养10—15天，每3—4天观察一次以决定是否换液和传代。
9. 细胞生长至一定数量后进行冻存，并需在冻存前进行核型分析及存档。

尊龙凯时支持科研工作者在细胞培养技术上的探索，为推动生物医疗研究做出贡献。了解和掌握细胞系和细胞株的建立，对您的实验室工作具有重要意义。